صبغة جرام Gram Stain

Crystal violet, Gram Stain, Iodine, Iodine Solution, Safranin, Stain

-------------------------------------------------------------------------





تعتبر صبغة جرام من أهم أنواع الصبغات المستخدمة في المستشفيات للتعرف على البكتيريا. ويعود الفضل في اكتشافها إلى الطبيب ذو الأصل الدانمركي هانس كريستيان جرام الذي كان يعمل في مختبر التشريح التابع لمستشفى Berlin في العام 1880 للميلاد. حيث قام بتطوير هذه الطريقة لتساعده على تفرقة أنواع البكتيريا المسببة لذات الرئة (Pneumonia)، حيث كانت أحد أنواع البكتيريا تصبغ بلون أحمر وأطلق عليها (بكتيريا سالبة جرام) والأخرى باللون الأزرق (بكتيريا موجبة جرام). و يعتمد لون البكتيريا في صبغة جرام على التركيب الكيميائي لجدار الخلية.








• التفاعلات عند إضافة الصبغة :


عند إضافة Crystal violet إلى الشريحة تدل هذه الصبغة إلى داخل جدار الخلية ، و عند إضافة محلول اليود Iodine Solution يتفاعل مع Crystal violet ليكون مركب يسمى Crystal violet – Iodine complex فعند إضافة الكحول Alcohol يدخل إلى جدار الخلية فإذا كان المركب الأول قابلاً لذوبان في الكحول فإنه سوف يذوب ويخرج خارج جدار الخلية وبذلك يفرغ جدار الخلية من أي صبغة فعند إضافة Safranin ذات اللون الأحمر فإنها ستدخل إلى جدار الخلية وتلونها وبذلك تكون البكتيريا سالبة لصبغة جرام أما إذا كان المركب الأول غير قابل للذوبان في الكحول فإن الـ Crystal violet سوف يثبت في جدار الخلية فعند إضافة Safranin فإنها لن تجد لها مكان داخل الخلية لتثبت فيه وبذلك تكو البكتيريا موجبة لصبغة جرام .




• الفرق بين البكتريا الموجبة لصبغة جرام والسالبة :

هو تركيب جدار الخلية الكيميائي حيث الموجبة لصبغة جرام تحتوي على أحماض أمنية أقل من السالبة لصبغة جرام و تحتوي مود دهنية في البكتيريا السالبة لجرام أعلى من الموجبة لجرام ، و الجدار الخلوي في البكتيريا الموجبة لصبغة جرام أقل تعقيداً من البكتيريا السالبة حيث إن الجدار الخلوي في البكتيريا الموجبة لصبغة جرام تتكون من طبقتين وهما طبقة الموكوبيبتيد mucopeptide وتعرف بـ peptidoglycan و الطبقة الثانية مكون من حمض التيكوئيك teicoic acid ، أما جدار الخلوي للبكتيريا السالبة لصبغة الجرام تتكون من ثلاث طبقات هي طبقة الموكوبيبتيد mucopeptide وتعرف بـ peptidoglycan و طبقة دهنية سكرية lipo polysaccharides و طبقة دهنية بروتينية lipo protein .







• طريق الصبغة :


1. تثبيت المعلق البكتيري .

2. نضيف صبغة الكرستال البنفسجي Crystal violet لمدة دقيقة ثم تغسل بالماء ( تيار خفيف ) .

3. نضيف اليود Iodine Solution لمدة دقيقة ثم تغسل بالماء ( تيار خفيف ) .

4. نضيف الكحول Alcohol لمدة 20ثانية ثم تغسل بالماء ( تيار خفيف ) .

5. نضيف الصفرانين Safranin لمدة 30 ثانية ثم تغسل بالماء ( تيار خفيف ) .

6. تجفف الشريحة ثم تفحص .